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细胞破碎和蛋白质溶解实验超声法

2019-05-21 09:08:36 450

实验方法原理

输入高能超声波可以破碎细胞,其机理可能与强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关。空化现象引起的冲击波和剪切力使细胞裂解。超声破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度及细胞类型等。

实验材料

细胞混悬液

试剂、试剂盒

缓冲液

仪器、耗材

超声波细胞裂解仪

实验步骤

1. 清洗后的组织用搅切机切碎成小块,混悬在至少两倍体积的缓冲液内;洗去培养液的细胞(细菌混悬在至少两倍体积的缓冲液内)

2. 将超声探头没入混悬液内,进行超声破碎。一般总超声时间约分为几个周期,如 4 × 30 s, 周期之间让样品在冰浴中冷却。

注意事项

1. 超声破碎常用于多种细菌和脑组织匀浆。根据具体情况可以适当延长破碎时间,一般不宜超过 10 min,但最多处理 1 g 细菌或组织。

2. 用相差显微镜检査细胞破碎的效率。

3. 超声破碎需提醒注意的一点是在整个过程中探头要保持低于混悬液表面。